ELISA試劑盒試驗(yàn)的影響因素

更新時(shí)間：2016-08-09

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　　ELISA試劑盒，即酶聯(lián)免疫法。ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，并具有操作簡(jiǎn)便、無(wú)放射性危害的優(yōu)點(diǎn)，因而多年來(lái)廣泛應(yīng)用于各高校、醫(yī)院、血站和科研機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室中。
　　影響ELISA實(shí)驗(yàn)的因素：
　　我們技術(shù)人員通過(guò)幾年的實(shí)驗(yàn)觀察，認(rèn)為影響ELISA實(shí)驗(yàn)的因素有如下三方面：
　　一、試劑盒
　　1、抗原、抗體活性對(duì)效價(jià)的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價(jià)降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA試劑盒靈敏度高，對(duì)雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照OD值偏高或假陽(yáng)性；
　　2、酶結(jié)合物濃度過(guò)高，也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。
　　二、試驗(yàn)儀器
　　1、加樣器是否經(jīng)過(guò)校正，酶免測(cè)定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不，會(huì)使結(jié)果忽高忽低；
　　2、每次洗板前，應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無(wú)堵塞。
　　三、操作
　　1、檢測(cè)前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏，以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低；
　　2、加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體（抗原）脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性；
　　3、洗滌不充分，會(huì)使結(jié)果假性增高，過(guò)分洗滌呈假陰性；
　　4、比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無(wú)異物、無(wú)水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí)，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會(huì)使OD值升高；
　　5、抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到平衡，依賴于溫度與時(shí)間。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度。
　　總之，由于ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的影響因素較多，在實(shí)際工作中操作規(guī)范、仔細(xì)，避免和排除各種因素的影響，使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。

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