食蟹猴和恒河猴SARS感染模型

(1)復制方法  年齡為3～6歲的健康恒河猴(Rhesus macaques)和食蟹猴(M. fascicularis)，按0.15ml/kg體重的劑量經(jīng)肌肉注射速眠新麻醉，然后經(jīng)鼻內(nèi)和氣管內(nèi)感染SARS- CoV BJ01株(10的5.7次方TCID50/ml)。模型動物在攻毒后第2、5、7日的咽拭子均分離出病毒，經(jīng)免疫熒光鑒定為SARS病毒。部分感染猴的肺部有出血點或出血斑。所有感染猴均可出現(xiàn)不同嚴重程度的多灶性單核細胞性間質(zhì)性肺炎，表現(xiàn)為肺泡間隔增寬、出血、滲出，肺泡腔內(nèi)有脫落的肺泡上皮細胞和巨噬細胞，小支氣管和細支氣管也有上皮細胞脫落；部分肺泡間隔出現(xiàn)少量以淋巴細胞為主的炎癥細胞浸潤，肺泡腔內(nèi)偶見透明膜形成。免疫組化可在肺泡巨噬細胞和Ⅰ型上皮細胞中檢測到SARS病毒抗原。感染動物尸檢中，在支氣管淋巴結(jié)和心肌中均能檢測到病毒RNA，并有炎癥改變。多數(shù)模型動物出現(xiàn)多灶性淋巴細胞性感染為主的肝炎，并伴有個別肝細胞壞死。

(2)模型特點  模型動物感染后出現(xiàn)病理學的改變，肺臟是病毒感染的主要靶器官，各肺葉均可見彌漫性肺泡損傷，形成透明膜，出現(xiàn)單核細胞浸潤。通過病毒學檢測及免疫學方法可從模型動物血、咽拭子、肺泡上皮細胞和支氣管淋巴結(jié)等組織樣品中檢測到SARS病毒RNA，說明病毒能在非靈長類動物體內(nèi)復制；并且有機體體液和細胞免疫應答。部分感染猴的白細胞和血小板數(shù)量從感染第3日起出現(xiàn)一過性的降低，然后逐漸恢復到正常的水平；動物體內(nèi)產(chǎn)生SARS病毒的專一性抗體，感染后第2、3、4周的血清抗 SARS-CoV特異性抗體水平均較高。由此可見，恒河猴可作為SARS病毒感染的動物模型，適用于SARS發(fā)病機制、藥物篩選、疫苗評價的研究。

(3)比較醫(yī)學  所有感染猴均未觀察到如高熱、干咳、昏睡、一過性的皮疹和呼吸困難等SARS典型臨床癥狀，有2/3的恒河猴出現(xiàn)一過性的低熱；而所有食蟹猴的體溫均在正常的范圍內(nèi)波動。但感染猴的肺組織病理變化，如彌漫性肺泡損傷、單核細胞浸潤等均與人類感染SARS冠狀病毒后的肺組織病變基本類似，且病理變化較人類輕。感染后模型動物體內(nèi)可產(chǎn)生SARS專一性抗體，感染4周左右時其血清中的抗體水平較高，這與人類SARS患者相同；SARS患者體內(nèi)產(chǎn)生的特異性IgM抗體，從7d開始出現(xiàn)至第11日可達到高峰；而IgG抗體則于10d后產(chǎn)生，至20d達到高峰；同時從感染猴的組織和分泌物中分離到病毒。總之，恒河猴感染SARS病毒的病理學改變與人類感染SARS病毒后出現(xiàn)的病理改變十分相似，且非人靈長動物具有與人相似的遺傳背景，所以可成為較為理想的SARS動物模型。但受到客觀條件的限制，猴無法在大規(guī)模的研究中使用，這種限制降低了本模型的應用價值。